培養細胞的過程中,換液是一項常規的操作,通過換液清除掉細胞在生長過程中產生的代謝廢物,補充新鮮的含血清培養基,使細胞能夠正常生長。
換液前工作準備
環境準備:相對密封、防塵、防菌的無菌室
操作者準備:雙手清潔呈可操作狀態
物品準備:超凈工作臺、CO2培養箱、裝有75%醫用消毒酒精的酒精噴壺、PBS緩沖液、含血清培養基、巴氏吸管、移液器、廢液缸。
工作準備:預熱完全培養基,酒精棉擦拭培養基瓶外表面后移入生物安全柜或超凈工作臺。
細胞培養箱中取出的細胞,酒精棉擦拭培養瓶或皿外表面,移入生物安全柜或超凈工作臺。待生物安全柜中的循環風將試劑瓶和培養瓶的外表面吹拂幾分鐘后,擰開培養基瓶蓋虛掩,擰開培養瓶瓶蓋虛掩,培養皿蓋不用擰。
方式一、細胞全換液
如果是貼壁細胞,可以用全量換液法,直接吸去全部舊培養基,補充足量新鮮完全培養基。
具體步驟:
1、將器材放入超凈臺,打開紫外照射滅菌,若是培養的細胞對溫度比較敏感,可以將含血清的培養基瓶放入37℃的水浴箱使得培養基溫度在37℃,再轉移到超凈臺紫外滅菌。另外,細胞培養間也需要紫外照射半小時左右。
2、從培養箱取出細胞培養瓶,用酒精噴壺在瓶子表面噴灑75%酒精消毒,轉移到超凈臺,打開蓋子,輕輕吸出舊的培養液,可用移液器加入新鮮含血清培養基,注意一定不要從細胞貼壁面加入培養基,應從側壁加,動作輕柔,以免沖落細胞。
3、加好培養基后,蓋上蓋子,在瓶子上做標記,注明換液時間,細胞種類,操作人員等信息。
4、放入培養箱之前應再次用酒精噴一噴瓶子表面,然后應記得整理操作臺,用酒精擦拭超凈臺臺面,清理廢液和垃圾。
方式二、細胞半換液
如果是懸浮細胞,可以用半量換液法。細胞半換液又稱細胞半量換液,即棄掉一半舊的培養基,再加一半新的進去,但該方法會損失一定量的細胞。
半換液原因:
1、給細胞提供適應的緩沖環境;
2、細胞生長過程中可能會分泌某些生長因子,促進生長;
3、節省材料
4、方便操作:比如96孔板,換液很麻煩。所以常采用排槍進行半換液;
5、對于懸浮細胞的培養,有時也會選用半換液減低細胞密度;
操作步驟:
1、吸去一半舊培養基
2、補充新鮮完全培養基。
懸浮細胞如果不想損失細胞,那就需要將培養物轉移到離心管中,離心去除舊培養基,再用新培養基重懸細胞沉淀。